你知道用Trizol的方法提取組織RNA時(shí)，需要注意什么嗎？
更新時(shí)間：2020-07-08 點(diǎn)擊次數(shù)：3166次你知道用Trizol的方法提取組織RNA時(shí)，需要注意什么嗎？
信帆生物為您答疑解惑在收集到生物材料之后，需要可進(jìn)行RNA制備工作。若需暫時(shí)儲(chǔ)存，則應(yīng)以液氮將生物材料急速冷凍后，儲(chǔ)存于-80℃冷凍柜。在制備RNA時(shí)，將儲(chǔ)存于冷凍柜的材料取出，立即以加入液氮研磨的方式打破細(xì)胞，不可以先行解凍，以避免RNase的作用。
1. 提取組織RNA時(shí)，每50~100mg組織用1ml Trizol試劑對(duì)組織進(jìn)行裂解：提取細(xì)胞RNA時(shí)，先離心沉淀細(xì)胞，每5~106個(gè)細(xì)胞加1ml Trizol后，反復(fù)用槍吹打或劇烈震蕩以裂解細(xì)胞；
2. 將上述組織或細(xì)胞的Trizol裂解液轉(zhuǎn)入EP管中，在試問(wèn)15~30℃下放置5分鐘；
3. 在上述EP管中，按照每1ml Trizol后加0.2ml氯方的量加入氯方，蓋上EP管蓋子，在手中用力震蕩15秒，在室溫下（15~30℃）放置2~3分鐘后，12000g（2~8℃）離心15分鐘；
4. 去上層水相置于新EP管中，按照每1ml Trizol加0.5ml異丙醇的量加入異丙醇，在室溫下（15~30℃）放置10分鐘后，12000g（2~8℃）離心10分鐘；
5. 棄上清，按照每1ml Trizol加1ml 75% 乙醇進(jìn)行洗滌，渦旋混合，7500g（2~8℃）離心5分鐘，棄上清；
6. 讓沉淀的RNA在室溫在自然干燥；
7. 用Rnase-free water 溶解RNA沉淀。
這么一說(shuō)大家用過(guò)都明白了如何用Trizol的方法提取組織RNA了，希望對(duì)大家有所幫助，順利提取出RNA!
你知道用Trizol的方法提取組織RNA時(shí)，需要注意什么嗎？
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